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細胞傳代時間經驗技巧

養細胞的小伙伴們都知道，細胞一定要傳代，因為細胞在培養過程中不斷的繁殖，數量也隨之增加，然而培養皿/培養瓶的空間有限，增殖受到抑制，所以必須將一部分細胞移至別的培養皿/培養瓶，讓細胞有足夠生長空間。細胞傳代也不僅僅是為細胞安一個更大的“家”，更重要的，是使細胞系或細胞株進一步增殖，這樣，我們才能有足夠的細胞做各種各樣的實驗。但是，對于傳代的時間，很多小伙伴都掌握不好，因為對于不同的細胞來說，判斷能否開始傳代的標準略有不同，今天，我們就主要來聊一下，細胞傳代的時間問題。什么時候...

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如何避免胎牛血清沉淀物的產生

胎牛血清中可能出現的沉淀物是什么？①纖維蛋白，它是經常出現的較大的沉淀物，可以達到1-2mm，可以用肉眼觀察到。②磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現渾濁，并且在37℃培養的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經常被誤認為是微生物污染。③膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質，它們也是血清中出現沉淀物的常見原因。關于細胞生長，我們的試驗以及經驗表明沉淀物不會影響細胞培養，我們的客戶以及其它血清生產商也證明了這一點。那...

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細胞的凍存與復蘇

一、程序凍存步驟（需梯度降溫）1、配置凍存液，凍存液推薦配比：55%（基礎培養基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推薦使用Procell通用血清型程序凍存液，貨號PB180436；2、制備好的細胞懸液計數，計算總細胞量；3、細胞離心后盡量吸干凈上清，離心轉速1200rpm（250g）3min；4、加入配置好的凍存液重懸，調整細胞濃度為3×106~1×107cells/mL；5、分裝入凍存管，一個凍存管分裝1~1.5毫升；6、推薦使用程序降溫...

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原代細胞的取材和分離方法

將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。原代細胞培養的步驟一般是：取材→分離→培養和維持，今天我們重點介紹原代細胞的取材和分離方法。一、取材人和動物細胞的取材是原代細胞培養成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養。取材的基本要求：①取材要注意新鮮和保鮮②應嚴格無菌③防止機械損傷④去除無用組織和避免干燥⑤應注意組織類型、分化程度、年齡等⑥作...

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原代細胞的復蘇步驟

細胞一般儲存在液氮中,溫度達196°C,理論上儲存時間是無限的。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以zuida限度的保存細胞活力。細胞復蘇就是要把原本冷凍保存(凍存)著的細胞恢復到一般的生長狀態,今天我們來看看原代細胞的復蘇步驟。一、檢查收到細胞株包裹時,請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請立即處理告訴寄方。細胞株請盡速開始培養,或立即冷凍保存(置于-70。C,隔夜后,移到iqN2)。二、冷凍細胞解凍1、依據細胞株說明書zhiding的基礎培養基種類、血清...

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原代細胞傳代方法哪有幾種?

原代細胞是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養的細胞,稱為原代細胞。-般認為,培養的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。在人工條件下使其原代細胞生存、生長、繁殖和傳代,進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞I程等問題的研究。那么關于原代細胞的傳代培養,我們應該怎么做呢?一般有以下兩種方法:一、貼壁細胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶內舊培養液。2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或與ED...

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